Práctica 18: Tinción de Ziehl-Neelsen

OBJETIVO

Determinar  las micobacterias que son ácido-alcohol resistente

MATERIAL Y REACTIVOS

·         Portaobjetos

·         Fuente de calor

·         Aceite de inmersión

·         Microscopio

·         Muestra (Cultivo bacteriano)

·         Fucsina fenicada

·         Alcohol-ácido (decolorante)

·         Azul de metileno

PROCEDIMIENTO

1.       Ponemos una gota de SSF en el porta.

2.       Tomamos una muestra de micobacterias.

3.       Homogenizamos la muestra y la extendemos sobre el porta.

4.       Desecamos y fijar con el mechero Bunsen.

5.       Cubrimos la preparación con fucsina fenicada durante 1 minuto.

6.       Colocamos sobre la preparación papel de filtro (para mantenerla húmeda)

7.       Añadimos fucsina

8.       Calentar durante 5 minutos a emisión de vapores.

9.       Lavamos con agua

10.   Decoloramos con alcohol ácido durante 30 segundos hasta eliminar el color rojizo.

11.   Añadimos azul de metileno como colorante de contraste durante 1-2 minutos.

12.   Lavamos, secamos y observamos al microscopio.

 

RESULTADO

Los BAAR se ven teñidos de rojo mientras que las no BAAR se ven de color azul