Práctica 7: Tinción de Gram

OBJETIVO

Distinguir entre Gram+ y Gram-

MATERIAL Y REACTIVOS

·         Portaobjetos

·         Asa de siembra

·         Mechero Bunsen

·         Suero salino fisiológico

·         Pinzas de madera

·         Cristal violeta (colorante)

·         Lugol (mordiente)

·         Alcohol acetona (decolorante)

·         Safranina (colorante)

·         Paralelas

·         Cubeta de tinción

·         Frasco lavador con agua destilada

·         Microscopio óptico

·         Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO

1.       Preparamos un frotis de un cultivo fresco utilizando 2 bacterias.

2.       Lo cubrimos con cristal violeta (colorante primario) durante 1 min y lavamos con agua destilada ligeramente.

3.       Añadimos lugol durante 1 min y lavamos con agua destilada.

4.       Decoloramos con alcohol-acetona, dejandolo actuar 30 segundos y lavar con abundante agua para que no se queden restos de alcohol.

5.       Añadimos Safranina (colorante de contraste) durante 1 minuto y 30 segundos

6.       Lavamos y dejamos secar al aire

7.       Observamos al microscopio con el objetivo de inmersión (100x)

RESULTADO

Las bacterias Gram positivas teñidas de azul violeta y las Gram negativas de rosa.